Kongo Röd är gold standard vid misstänkt amyloidos

Kongo Röd är precis som AB-PAS en specialfärg inom histopatologin. Den används till att färga paraffininbäddade preparat, men kan dessutom också användas till att färga fryssnitt där frågeställningen är om patienten lider av amyloidos. Kongo Röd är till och med gold standard för diagnosticeringen av denna sjukdom.

Amyloidos

Det finns alltså en sjukdom som heter amyloidos. Sjukdomen innebär att ett protein inte bryts ner av kroppen i tillräckligt snabb takt och därför lagras i kroppen. Mängden lagrat amyloid ökar därför med tiden, och ju mer som lagrats desto sämre blir funktionen i det organ där lagringen sker. Det sker ofta i exempelvis lever, njurar och mjälte. Därför kan man diagnosticera amyloidos genom att ta en liten biopsi från organet, och skicka det till patologen som färgar biopsin med Kongo Röd.

Hur färgningen går till

När du har ett preparat som ska färgas in med Kongo Röd ska du ta två snitt. Det ena snittet ska snittas och färgas enligt rutin; tjockleken på snittet ska vara 2-3 um och du färgar snittet med eosinhematoxylin (HE) för att få en översikt över organets morfologi. Det andra snittet ska färgas in med Kongo Röd. Hur du tar det andra snittet skiljer sig från rutin. Nu ska du ta ett glas på vilket det sitter en positiv kontroll för amyloidos.

Positiv kontroll

Den positiva kontrollen består av vävnad med redan känd amyloidos. Snittet sitter så högt upp på glaset att du också har plats med det andra snittet som kommer från patientprovet du arbetar med. Både snittens tjocklek ska vara mellan 5 och 10 um. Anledningen till detta är att den amyloida vävnaden inte färgas in om snittet är alltför tunt.

Den positiva kontrollen säkerställer att metoden (färgningen) fungerar. Kontrollen måste färgas in korrekt och visa positivt för Kongo Röd om du ska kunna lita på att färgningen av patientprovet är korrekt. Om både kontrollen och patientprovet förblir ofärgade av Kongo Röd, hur ska du då kunna lita på att patienten inte har amyloidos? Det kanske var färgningen som misslyckades.

Men det räcker inte att färga snittet med den sura färgen Kongo Röd. Du ska också färga in samma snitt (tillsammans med den positiva kontrollen) med hematoxylin, för att skapa en differentiering på snittet. Jämför detta med hur du skapar en differentiering i samband med en AB-PAS-färgning.

Resultatet

Kongo röd kan identifiera felvikta proteiner. I ett ljusmikroskop färgar Kongo Röd amyloid vävnad, elastiska fibrer och eosinofil granula röd. Cellkärnan blir blå. Men om du tittar på glaset genom polariserat ljus kommer färgen på den amyloida vävnaden vara äppelgrön. Till det behöver du naturligtvis ett mikroskop som har en tillsats som låter dig använda polariserat ljus. Det vanligaste är nog att man använder sig av ett ljusmikroskop.

Kongo
Foto: Ed Uthman, patolog i Houston, Texas, USA. Bilden är hämtad från Pinterest: https://www.pinterest.se/pin/753016000169426576/ https://creativecommons.org/licenses/by/2.0/

PHindikator

Kongo Röd kan också användas som pH-indikator. Färgen blir blålila vid pH 3 och röd vid pH 5. Därför har det tidigare också använts för att färga kläder.

Källa

American Chemical Society. Molecule of the week archive. Congo red.2014. (Hämtad 2019-09-20). https://www.acs.org/content/acs/en/molecule-of-the-week/archive/c/congo-red.html Accent 1;\https://creativecommons.org/licenses/by/2.0/

Bourne, D. Arkana Laboratories. Congo Red Stain. https://www.arkanalabs.com/congo-red-stain/. 2017. (Hämtad 2019-02-19).

Föreningen för stöd av amyloidosforskning. http://amyloidos.se/index.html. (Hämtad 2019-02-19).

Giri, D. Alkaline congo red staining technique for amyloid: principle, procedure, and interpretation. 2019. (Hämtad 2019-01-19). Laboratoryinfo.com https://laboratoryinfo.com/alkaline-congo-red-staining-technique-for-amyloid/

IHCWorld. Life Science Products & Services. Modified Highman´s Congo Red Staining Protocol for Amyloid. 2011. (Hämtad 2019-02-19).  http://www.ihcworld.com/_protocols/special_stains/congo_red_highman.htm

National Center for Biotechnology Information. PubChem Compound Database; CID=11313, https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/11313 (accessed Feb. 20, 2019).

Congo Red – Putchler´s modification – amyloid https://library.med.utah.edu/WebPath/HISTHTML/MANUALS/CONGORED.PDF

Vad tycker du?

Denna webbplats använder Akismet för att minska skräppost. Lär dig hur din kommentardata bearbetas.