Biomedicinsk Analytiker

Sveriges största site för Biomedicinska Analytiker

Biotypning och resistensbestämning av bakterier

Biotypning

Under bakterielabben vi gjorde fem dagar i rad förra veckan gjorde vi en biotypning av E coli. När man gör det får man veta art och typ av bakterien. Då tog vi helt enkelt en enda koloni av en bakterie som vi trodde var E coli. Vi placerade den kolonin i fyra rör som innehöll fyra olika ämnen. Ämnena skulle reagera på olika sätt beroende på bakterie.

  • KIA; I ett rör som innehåller KIA (Kigler Iron Agar, Kigler järnagar) kan man se om det förekommer någon form av jäsning (av glukos eller laktos). Jäsningen skapar syra, pH-värdet i röret sjunker och innehållet blir gult. Om det bara är glukosen som jäser sker en helt annat typ av färgning av innehållet. Det blir fortfarande gult i nedre delen av röret. Men i den övre delen av röret blir det basiskt därför att olika aminosyror bryts sönder. Därför blir färgen i den övre delen av röret röd. Ett tredje alternativ är att bakterierna jäser (vätesulfid) kommer järnsulfid att fällas ut, det blir till en gråsvart färg.
  • Mannitol; ett sötningsmedel. Om bakterien jäser innehållet blir röret gult, om det blir någon form av gasbildning kommer det att synas genom att det blir en liten luftbubbla inne i ett mindre rör som ligger upp-och-ner inne i det stora röret.
  • Urea; urinsyra alltså ett ämne som finns i urin. Ammoniak bildas i röret, färgen blir chockrosa om bakterierna är E coli.
  • Indol/ONPG; Man droppar lite av Kovacs reagens i lösningen med bakterier. Om bakterier visar positiv på indol blir innehåller chockrosa. Om det finns betagalaktos sönderdelas ONPG till galaktos och ortonitrofenol och färgen blir gul.
IMG_2314

BIlden är tagen under en annan laboration, men visar en biotypning, eller artbestäming som det också heter.

Resistensbestämning

Vi gjorde också en resistensbestämning av E coli. Vi tog en agarplatta på vilken vi hade odlat  ut bakterierna. Vi placerade sex ”diskar,” alltså sex små runda papperslappar i ungefär samma storlek som de små runda lapparna från en hålslagarapparat, men tjockare. De var impregnerade med varsin typ av antibiotika, och det stod en eller två bokstäver på dem för att man skulle vet vilken typ av antibiotika som fanns på lappen. Plattan inkuberades i ett värmeskåp i ett dygn.

Dagen därpå kunde vi tydligt se mot vilken typ av antibiotika bakterierna var resistent eller känslig. Runt de diskar som impregnerats i antibiotika som bakterierna var känsliga mot fanns en runt cirkel av helt ren agar. Alla bakterier i den zonen runt disken var döda. Om bakterierna var resistenta, då var disken överväxt med bakterier. Men… inte riktigt så enkelt var det. Vi var tvungna att ta fram en linjal och mäta storleken på området runt diskarna, och utifrån en tabell bestämma om bakterien är resistent. Storleken på området är lite olika beroende på vilken typ av antibiotika det gäller.

Bilden publicerad med tillstånd av Scienceprofonline.com

Escherichia coli

bild 1-2

E Coli odlad i buljong, tillsammans med ett ämne som ändrar färg vid pH-omslag.

E Colli är en bakterie som vanligtvis finns i tarmen hos oss människor. Man kan också hitta dem i vattendrag, eftersom djur bajsar ute i naturen. De är helt ofarlig så länge man inte får dem på fel ställe, När kvinnor få urinvägsinfektion beror de ofta på att de fått E coli i urinröret, från sin egen tarm. Bakterien finns alltid i avföring, så om man vill veta om en brunn är förorenad är det en bra idé att titta just efter E coli, som är en ”indikatorbakterie”. Den tyder alltså på förorening.

E coli är en gramnegativ stav. Den jäser laktos samtidigt som syra och gas bildas. Om placerar bakterierna i ett ämne som heter tryptofan (en aminosyra) bildar bakterierna ett annat ämne som heter indol. Indol är helt enkelt en produkt som skapas när tryptofan förbrukas. De tål också en hög temperatur som inte alla bakterier tål, man kan odla dem i 44 C.

Lactobacillicus

Lactobaciller finns i viss filmjölk, därför att de är bra för magen. De jäser kolhydrater och bildar då mjölksyra. Mjölksyrade grönsaker är jättebra för magen, exempelvis mjölksyrad surkål. De är ”de goda” bakterierna. Detta är också en stav, om man tittar i mikroskopet, men den är till skillnad från E coli grampositiv (läs mitt inlägg om gramfärdning). De kan liga i långa kedjor. Förutom i magen finns de också i munnen och i slidan för att hålla pH-värdet lågt.

Salmonella

Salmonella är, precis som E coli en gramnegativ stav. Den hör inte till normalfloran, utan kan snarare ställa till med en del obehag om den hamnar i magen.

Under labben fick vi odla salmonellabakterier i A-filmjölk som innehåller mjölksyra, för att se hur mjölksyran påverkar tillväxten av salmonella. Det visade sig att tillväxten av salmonellabakterien hämmas av mjölksyra (som kommer från lactobacillicus). Detta syntes eftersom nästan inga salmonellabakterier alls hade växt till sig när de befann sig i en lösning av mjölk med lactobaciller.

Källa:

Forslund, T. Våra vänner och fiender. Laboration. Linköpings Universitet. Vecka 21, maj 2014.

6 comments on “Biotypning och resistensbestämning av bakterier

  1. Pingback: VFU2 – första veckan | Biomedicinsk Analytiker

  2. Pingback: Praktiskt Tentamen: Laboratorievetenskap inom endokrinologi och infektion | Biomedicinsk Analytiker

  3. Pingback: Okända prover: Övriga analyser | Biomedicinsk Analytiker

  4. Pingback: Okända prover: Nasopharynx | Biomedicinsk Analytiker

  5. Pingback: Okända prover: Feaces | Biomedicinsk Analytiker

  6. Pingback: Praktisk Tentamen; Laboratorievetenskap i molekylärbiologi och metabolism | Biomedicinsk Analytiker

Kommentera

Fyll i dina uppgifter nedan eller klicka på en ikon för att logga in:

WordPress.com Logo

Du kommenterar med ditt WordPress.com-konto. Logga ut / Ändra )

Twitter-bild

Du kommenterar med ditt Twitter-konto. Logga ut / Ändra )

Facebook-foto

Du kommenterar med ditt Facebook-konto. Logga ut / Ändra )

Google+ photo

Du kommenterar med ditt Google+-konto. Logga ut / Ändra )

Ansluter till %s

Information

This entry was posted on 28 maj, 2014 by in - Laborationer T2, - Mikrobiologi T2, Termin 2 and tagged , .
%d bloggare gillar detta: