Burkers kammare

Nu är jag inne på termin 2, och det märks verkligen att nivån på studierna har höjts. Det är väldigt mycket att göra och jag har hamnat lite på efterkälken med min blogg även om jag gärna vill berätta hur det är att plugga till biomedicinsk analytiker. Ska försöka komma ikapp. Nu den här anteckningen från termin ett, som handlar om Burkers Kammare. Sedan kommer jag att övergå till att skriva om vad som sker under den andra termin .

BURKER
Några exempel på de olika rutorna. Ruta A är markerad med en röd linje, ruta B är lila, ruta C är röd, ruta D är orange och ruta E är grön.

Cellräkningen gjorde vi som en del i laborationen som handlade om cellodling. Burkers kammare är en liten plastplatta med en brunn och några linjer. I den kan man pytsa 10 mikroliter cellsuspension (celler utspädda i vätska) för att räkna dem. Det finns tydliga regler för hur cellerna ska räknas. Kammaren är uppdelad i flera rutor med olika storlek. Den består av flera A-rutor, som i sin tur består av flera B-, C-, D- och E-rutor. En B-ruta består av en liten del av en A-ruta, en hel E-ruta.. Ja, rutorna går helt enkelt in i varandra enigt bestämda regler. Brunnens djup är 0,1 mm, och ruta A har volymen 1/10 mm³, ruta B 1/160 mm³, ruta C 1/1000 mm³, ruta D 1/4000 mm³, ruta E 1/250 mm³, och ruta C + D har volymen 1/800 mm³.

När man räknar cellerna placerar man burkerkammaren i ett ljusmikroskop. Sedan ska man ha en struktur för hur man räknar. Vi räknade alla celler i en A-ruta. Det var viktigt att bestämma sig för hur de celler som hamnat precis på en linje ska räknas; tillhör cellen som ligger på gränsen mellan en B-ruta och en C-rutan B eller C? Cellen ska ju bara räknas en gång.

Man tittar i mikroskopet hela tiden. Bredvid sig har man ett litet räkneverk, varje gång man räknat en cell trycker man en gång på knappen. För varje räknad cell ökar summan på räkneverket, och när man är klar ser man hur många celler man räknat på räkneverket också. Då kan man räkna ut koncentrationen enligt formeln;

n x 16 x 10^4 x SF

n är det antal celler jag räknat i kammarens ruta A. SF är min spädningsfaktor, alltså hur mycket jag spätt cellerna i cellsuspensionen. Om jag kom fram till att det finns 503 celler i ruta A, och min spädningsfaktor är 1:10, då kommer talet att se ut så här:

503 x 16 x 10^4 x 10

Svaret är antal celler/mL cellsuspension. I det här fallet har jag 804800000 celler/mL, alltså ca 80,4 x 10^7 celler/mL cellsuspension.

Källa: 

Lindqvist Appell, M. Cellodling. Laboration. Linköpings Universitet. Våren 2013.

rkpegg. Counting Cells. Film. YouTube. 2009-05-29. (Hämtad 2014-02-05).

7 comments

  1. spädning 1 = 1:10
    spädning 2 = 1:5
    den totala spädningen = 50

    (52+50+48)/3 =50

    antal celler * spädningsfaktorn *0,01 = 50 * 50 *0,01 = 2,5 milj/ml vilket innebär 2,5 *10^6 celler/ml

    1. menar
      antal celler * spädningsfaktorn *0,01 = 50 * 50 *0,01 = 25 milj/ml vilket innebär 2,5 *10^7 celler/ml

      1. Hej Annika, jag brukar inte hjälpa studenter med uppgifter. Men jag frågade hur du räknat… Först och främst – vad tycker du vore mest rimligt? Vilket svar och varför?
        Varför är ditt svar inte rimligt? Hur tänker du? och jag tänker att vad menar du med att den totala spädningen är 50? Varifrån får du siffran 50? Vilken typ av kammare har du använt – det finns många olika burker kammare och alla kräver olika formler. Det verkar inte som att du använt den kammaren som jag använt, eftersom du verkar ha använt en helt annat formel? Eller har jag fel?

      2. För resten – vad menar du med total spädning? Har du slagit ihop två olika spädningsfaktorer till en och räknat på den? Det kan du inte göra….

  2. hej är en bma student och håller just nu på med mikroskopering. har fastnat på en uppgift och det hade varit jättesnällt ifall jag hade kunnat få hjälp med den.

    ”Du vill ta reda på koncentrationen av celler i en lösning. Du blandar 50μl cellsuspension med 450 μl PBS i ett nytt rör. Av denna lösning tar du 20 μl och blandar med 80 μl trypanblått i ytterligare ett nytt rör. Från denna lösning sätter du 10 μl i en räknekammare. Antalet levande celler när du räknar tre olika A-rutor blir 52, 50 resp 48. Hur stor koncentration av celler har du i ditt ursprungliga prov, uttryckt som miljoner celler/ml?”

    Fick svaret till 2500000 celler/ml men det känns inte alls rimligt…

    tack på förhand!!

Vad tycker du?