Burkers kammare hjälper dig att räkna cellerna i din cellsuspension

burkers kammare
Några exempel på de olika rutorna. Ruta A är markerad med en röd linje, ruta B är lila, ruta C är röd, ruta D är orange och ruta E är grön.

Burkers kammare är en tunn liten plastplatta med en brunn, och med smala ränder och små rutor i. För att kunna se ränderna och rutorna måste du titta genom ett ljusmikroskop. Kammaren har ett djup också, och den är till för att pipettera ner 10 mikroliter cellsuspension i. Med hjälp av kammaren kan du räkna ut hur många celler det finns i din suspension. Det här är något du använder dig av om du som biomedicinsk analytiker t ex arbetar med cellodling. Då är du förmodligen utbildad med inriktning mot biomedicinsk laboratorievetenskap. Biomedicinsk laboratorievetenskap är för dig som vill arbeta på labb.

Cellräkning med hjälp av burkers kammare

Det finns tydliga regler för hur cellerna ska räknas. Kammaren är uppdelad i flera rutor med olika storlek. Den består av flera A-rutor, som i sin tur består av flera B-, C-, D- och E-rutor. En B-ruta består av en liten del av en A-ruta, en hel E-ruta.. Ja, rutorna går helt enkelt in i varandra enigt bestämda regler. Brunnens djup är 0,1 mm, och ruta A har volymen 1/10 mm³, ruta B 1/160 mm³, ruta C 1/1000 mm³, ruta D 1/4000 mm³, ruta E 1/250 mm³, och ruta C + D har volymen 1/800 mm³.

Struktur – varje cell räknas bara en gång

När du räknar cellerna placerar du burkers kammare i ditt ljusmikroskop. Sedan ska du ha en struktur för hur du räknar. Vi räknade alla celler i en A-ruta. Det var viktigt att bestämma sig för hur de celler som hamnat precis på en linje ska räknas; tillhör cellen som ligger på gränsen mellan en B-ruta och en C-ruta B eller C? Cellen ska ju bara räknas en gång.

Du tittar i mikroskopet hela tiden. Bredvid dig har du ett litet räkneverk, varje gång du räknat en cell trycker du en gång på knappen. För varje räknad cell ökar summan på räkneverket, och när du är klar ser du hur många celler du räknat på räkneverket också. Då kan du räkna ut koncentrationen enligt formeln;

n x 16 x 10^4 x SF

n är det antal celler jag räknat i kammarens ruta A. Förkortningen SF är min spädningsfaktor, alltså hur mycket jag spätt cellerna i cellsuspensionen. Om jag kom fram till att det finns 503 celler i ruta A, och min spädningsfaktor är 1:10, då kommer talet att se ut så här:

503 x 16 x 10^4 x 10

Svaret är antal celler/mL cellsuspension. I det här fallet har jag 804800000 celler/mL, alltså ca 80,4 x 10^7 celler/mL cellsuspension.

Källa: 

Lindqvist Appell, M. Cellodling. Laboration. Linköpings Universitet. Våren 2013.

rkpegg. Counting Cells. Film. YouTube. 2009-05-29. (Hämtad 2014-02-05).

7 kommentarer

  1. spädning 1 = 1:10
    spädning 2 = 1:5
    den totala spädningen = 50

    (52+50+48)/3 =50

    antal celler * spädningsfaktorn *0,01 = 50 * 50 *0,01 = 2,5 milj/ml vilket innebär 2,5 *10^6 celler/ml

    1. menar
      antal celler * spädningsfaktorn *0,01 = 50 * 50 *0,01 = 25 milj/ml vilket innebär 2,5 *10^7 celler/ml

      1. Hej Annika, jag brukar inte hjälpa studenter med uppgifter. Men jag frågade hur du räknat… Först och främst – vad tycker du vore mest rimligt? Vilket svar och varför?
        Varför är ditt svar inte rimligt? Hur tänker du? och jag tänker att vad menar du med att den totala spädningen är 50? Varifrån får du siffran 50? Vilken typ av kammare har du använt – det finns många olika burker kammare och alla kräver olika formler. Det verkar inte som att du använt den kammaren som jag använt, eftersom du verkar ha använt en helt annat formel? Eller har jag fel?

      2. För resten – vad menar du med total spädning? Har du slagit ihop två olika spädningsfaktorer till en och räknat på den? Det kan du inte göra….

  2. hej är en bma student och håller just nu på med mikroskopering. har fastnat på en uppgift och det hade varit jättesnällt ifall jag hade kunnat få hjälp med den.

    ”Du vill ta reda på koncentrationen av celler i en lösning. Du blandar 50μl cellsuspension med 450 μl PBS i ett nytt rör. Av denna lösning tar du 20 μl och blandar med 80 μl trypanblått i ytterligare ett nytt rör. Från denna lösning sätter du 10 μl i en räknekammare. Antalet levande celler när du räknar tre olika A-rutor blir 52, 50 resp 48. Hur stor koncentration av celler har du i ditt ursprungliga prov, uttryckt som miljoner celler/ml?”

    Fick svaret till 2500000 celler/ml men det känns inte alls rimligt…

    tack på förhand!!

Vad tycker du?

Denna webbplats använder Akismet för att minska skräppost. Lär dig hur din kommentardata bearbetas.